产品简介：

在单克隆抗体制备过程中，获得杂交瘤细胞（hybridoma）是核心技术环节。杂交瘤细胞由骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞融合而成。为有效筛选融合后的杂交瘤细胞，通常采用添加有 HAT 的培养基进行选择性培养。

HAT 添加剂中的氨基蝶呤（Aminopterin）通过抑制二氢叶酸还原酶（dihydrofolate reductase，DHFR）的活性，阻断 DNA 的从头合成途径（de novo pathway）。在此条件下，无法利用补救途径（salvage pathway）合成核苷酸的细胞生长将受到抑制。培养基中同时添加次黄嘌呤（hypoxanthine）和胸苷（thymidine），使得表达次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（HPRTase）和胸苷激酶（thymidine kinase，TK）的细胞能够通过补救途径合成核苷酸。因此，HAT 培养基可选择性抑制未融合的骨髓瘤细胞以及同型融合细胞（骨髓瘤–骨髓瘤融合细胞）的生长。虽然原代脾细胞为 HPRTase 阳性，但由于其在体外培养环境中无法长期存活，会在传代过程中逐渐被淘汰。

最终，只有在同时具备骨髓瘤细胞“永生化”特性与脾细胞 HPRTase/TK 阳性特征的双重优势下，杂交瘤细胞才能在 HAT 培养基中存活并扩增。该筛选过程通常持续 10–14 周。随后，细胞需转移至仅含次黄嘌呤和胸苷、不含氨基蝶呤的 HT 培养基中继续培养 2–3 周，最终转入常规杂交瘤细胞培养基中进行维持和扩增。

“中科迈晨”提供的 HAT 添加剂为 50× 浓缩液，使用时根据工作浓度直接加入培养基即可。